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        常見問題 行業動態

        elisa檢測試劑盒有那三點導致乙肝檢測成陽性、陰性結果?

        elisa法廣泛用于乙肝兩對半檢測。但elias試劑盒檢測中影響因素較多,有時可見到一些假陽性或假陰性,本文檢驗君就ELISA測定乙肝兩對半的影響因素及對策做如下討論:

        elisa檢測試劑盒有那三點導致乙肝檢測成陽性、陰性結果?

        1、樣本采集與處理的影響

        (1)標本嚴溶血及混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈,殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性,催化底物顯色造成假陽性,嚴重溶血標本禁用。

        (2)采血試管洗滌不徹底、反復使用易交叉污染;塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關;EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

        (3)標本凝固不全,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h完全血塊完全收縮。在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。


        2、試劑的影響

        (1)乙肝兩對半試劑廠家較多;不同廠家出產的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別,不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%—99.3%,78~89%存在較大差異。有的廠家酶標板孔間A值差大于15%;標記酶的活性及顯色液的穩定比較差。使用質劣的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質量的試劑是保證結果準確的關鍵之一。

        (2)不同方法學的檢測試劑,會使兩對半結果出現一些不同。例如:在實際工作中常用ELISA檢測HBsAg結果為陰性,而電化學發光檢測為陽性。除方法學的靈敏度外;還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標志物檢測存在差異,建議試劑廠家對劑的制備應該考慮亞型及型濃度的問題。


        3、操作技術的影響

        (1)加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準確性,直接影響檢測結果。由于吸嘴構造特殊,導致清洗困難,加大了交叉污染的機會。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經常清洗,定期校準。

        (2)溫浴影響,96孔酶標板結構特別;易產生邊緣效應,抗原抗體結合及酶促反應對溫度有嚴格要求,酶標板周圍與內部孔升降溫速率不同,造成周邊與內部孔結果差異;干浴與水浴存在明顯的差異,盡可能使用水浴,并要求固相板放入水中,減少受熱不均,貼密封膜,防止污物浸入。



         


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